অক্সিডেস পরীক্ষা: যুক্তি, পদ্ধতি এবং ব্যবহার - জীববিদ্যা - 2025

অক্সিডেস পরীক্ষা একটি ডায়গনিস্টিক পদ্ধতি হল যে শো এনজাইম জটিল নামক cytochrome অক্সিডেস গ উপস্থিতিতে। এই সিস্টেমটি অক্সিজেনায়িত সাইটোক্রোমের রূপান্তরকে প্ররোচিত করে, যেহেতু এটি অক্সিজেন গ্রহণ করে এবং ফলস্বরূপ এটি শ্বাসকষ্টে শেষ ইলেক্ট্রন গ্রহণকারী (এইচ ⁺) হিসাবে কাজ করে ।

অক্সিডেস শব্দটি এনজাইম সাইটোক্রোম অক্সিডেসকে বোঝানোর একটি সংক্ষিপ্ত উপায়, যা ইন্ডোফেনল অক্সিডেস নামেও পরিচিত। প্রাচীনকালে এটি বিশ্বাস করা হত যে এনজাইম সাইটোক্রোম অক্সিডেস এবং ইন্ডোফেনল অক্সিডেস দুটি পৃথক এনজাইম ছিল, তবে আজ তারা একই হিসাবে পরিচিত।

ইতিবাচক এবং নেতিবাচক অক্সিডেস পরীক্ষা। উত্স: কোনও মেশিন-পঠনযোগ্য লেখক সরবরাহ করেন নি। Alpha.prim ~ Commonswiki ধরে নেওয়া (কপিরাইট দাবির উপর ভিত্তি করে)।

তাদের অংশের জন্য সাইটোক্রোম হিমোপ্রোটিন যা আয়রন ধারণ করে এবং সাইটোক্রোম অক্সিডেস সিস্টেম সম্পূর্ণ করে। সাইটোক্রোম বিভিন্ন প্রজাতিতে পৃথক হতে পারে।

সাইটোক্রোমের বিভিন্ন প্রকার রয়েছে (সাইটোক্রোম এ 1, এ 2, এ 3 এবং 0)। কিছু ব্যাকটিরিয়া কেবল একটিই উত্পাদন করতে পারে তবে অন্যরা একবারে দুই বা তিনটি পর্যন্ত উত্পাদন করতে পারে। এই অর্থে সাইটোক্রোম a এবং a3 এর উপস্থিতি সাইটোক্রোম অক্সিডেস সি নামে পরিচিত। এটি সেই ধরণের সাইটোক্রোম যা অক্সিডেস পরীক্ষা সনাক্ত করে।

জেনেরা নিয়েসরিয়া এবং সিউডোমোনাসে সাইটোক্রোম অক্সিডেস সি থাকে। এই জেনারটি ধনাত্মক অক্সিডেস পরীক্ষা দেয়, যথাক্রমে অ্যাকিনেটোব্যাক্টর এবং স্টেনোট্রোফোমোনাস জেনার থেকে তাদের আলাদা করতে সহায়তা করে।

অন্যান্য জেনেরাও রয়েছে যা অক্সিডেস পজিটিভ।

ভিত্তি

সাইটোক্রোম অক্সিডেস সি সিস্টেমের বৈশিষ্ট্য

সাইটোক্রোম অক্সিডেস সি সিস্টেম নিম্নলিখিত পদ্ধতিতে কাজ করে: অক্সিডেস-পজেটিভ অণুজীবগুলি অ্যারিজিক শ্বসনের মাধ্যমে শক্তি উত্পাদন করতে অক্সিজেন ব্যবহার করে। এই পদ্ধতিতে অক্সিজেন যেমন NADH ⁺ হিসাবে দাতা পদার্থ থেকে রিসেপটর পদার্থগুলিতে ইলেকট্রন পরিবহনের জন্য ধন্যবাদ কাজ করে।

মাইক্রো অর্গানিজমটি ধারণ করে এমন সাইটোক্রোম অক্সিডেস সিস্টেমের উপর নির্ভর করে এনার্জি (এটিপি) এবং জল বা হাইড্রোজেন পারঅক্সাইড উত্পাদন করে।

এজন্য বেশিরভাগ অক্সিডেস পজিটিভ ব্যাকটিরিয়া হ'ল ধনাত্মক, এটি উত্পাদিত হাইড্রোজেন পারক্সাইড নির্মূল করার জন্য একটি প্রয়োজনীয় শর্ত, যেহেতু এই পদার্থটি ব্যাকটিরিয়ার পক্ষে বিষাক্ত।

সাইটোক্রোম অক্সিডেস সি সিস্টেমটি কিছু বায়বীয় ব্যাকটিরিয়ায় উপস্থিত থাকে, কিছু অনুষঙ্গী অ্যানেরোবস, কয়েকটি মাইক্রোইরোফিলিক এবং কোনও কঠোর অ্যানেরোবস নেই। পরেরটি বোধগম্য, যেহেতু কঠোর অ্যানারোব অক্সিজেনের উপস্থিতিতে বাঁচতে পারে না, তাই তাদের সাইটোক্রোম অক্সিডেস সিস্টেমের অভাব রয়েছে।

পরীক্ষার নীতি

এই পরীক্ষায় এটি এমন পদার্থ ব্যবহার করে যা কৃত্রিম বৈদ্যুতিন গ্রহণকারী হিসাবে কাজ করে এবং বৈদ্যুতিন পরিবহন চেইনের অভ্যন্তরে প্রাকৃতিককে প্রতিস্থাপন করে।

প্রধানত, প্যারাফেনিলেডিনামিন এবং ইন্ডোফেনল এর মতো রঙগুলি ব্যবহৃত হয়, যা রিসেপটর সাবস্ট্রেটস এবং কৃত্রিম ইলেকট্রন দাতা হিসাবে কাজ করে।

প্যারাফেনিলেডিনামিন সাইটোক্রোম অক্সিডেস সি সিস্টেম দ্বারা জারণ করা হয়। এর হ্রাস আকারে রঞ্জক বর্ণহীন, তবে এর জারিত আকারে এটি রঙিন হয়।

এভাবেই সাইটোক্রোম অক্সিডেস সি সিস্টেমের উপস্থিতি প্রমাণিত হয়; যেহেতু একটি ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া ব্যবহৃত রিএজেন্টের উপর নির্ভর করে একটি ল্যাভেন্ডার বা নীল-বেগুনি রঙ তৈরি করবে।

অন্যদিকে, যদি শ্বাস প্রশ্বাসের চেইনে সর্বশেষ ইলেক্ট্রন গ্রহণযোগ্য পদার্থ অক্সিজেন থেকে পৃথক হয় তবে অক্সিডেস পরীক্ষাটি নেতিবাচক হবে (কোনও রঙ উত্পাদন নেই); এনাওরবিক অণুজীবের ক্ষেত্রে এটিই ঘটে।

তেমনি, অণুজীবের দ্বারা ব্যবহৃত সাইটোক্রোম সাইটোক্রোম অক্সিডেস সি থেকে পৃথক হলে এটি নেতিবাচক পরীক্ষাও দেবে।

প্রক্রিয়া

অক্সিডেস পরীক্ষার জন্য বিভিন্ন রিএজেন্টস এবং প্রোটোকল রয়েছে, সমস্ত একই উদ্দেশ্যে।

রিজেন্টস

কোভাক্স রিএজেন্ট, গর্ডন এবং ম্যাকলিড রিএজেন্ট, নাদি রিএজেন্ট, কার্পেন্টার, সুহরল্যান্ড এবং মরিসন রিজেন্ট এবং অক্সিডেস ডিস্কের ব্যবহার।

-কোভাকস অক্সিডেস রিএজেন্ট

এটি 1% টিট্রেমেথাইল-পি-ফিনাইলেনিডিয়ামিন ডাইহাইড্রোক্লোরাইড দিয়ে তৈরি।

কোভাক্সের রিএজেন্টটি 50 মিলি পাত্রে পানিতে উপরে উল্লিখিত পদার্থের 1 গ্রাম দ্রবীভূত করে তৈরি করা হয়। সম্পূর্ণ দ্রবীভূত হওয়া পর্যন্ত এটি সূক্ষ্মভাবে উত্তপ্ত হয়। অ্যাম্বার বোতল পর্যাপ্ত ক্ষমতাতে স্থানান্তর করুন এবং পাতিত জল দিয়ে 100 মিলি পরিমাণে আয়তন তৈরি করুন। ব্যবহার করার আগে কমপক্ষে 15 মিনিট অপেক্ষা করুন। আলো থেকে সুরক্ষিত একটি ফ্রিজে সংরক্ষণ করুন।

এটি কোভাক্স অক্সিডেস রিএজেন্ট হিসাবে লেবেলযুক্ত, এটি কোভাক্স রিজেন্ট থেকে ইন্ডোল পরীক্ষার প্রকাশের জন্য পৃথক করার জন্য। এই রিজেন্টটি সবচেয়ে সংবেদনশীল, কম বিষাক্ত তবে বাকী রিজেন্টগুলির তুলনায় বেশি ব্যয়বহুল।

এই রিএজেন্টের সাথে একটি ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া প্রমাণিত হবে কলোনির রঙটি ল্যাভেন্ডারে পরিবর্তিত হবে, যা দ্রুত বেগুনি প্রায় কালো হয়ে যায়। একটি নেতিবাচক প্রতিক্রিয়া স্পষ্ট হয় কারণ কলোনিতে কোনও রঙ পরিবর্তন হয় না বা এটি একটি হালকা গোলাপী রঙ ধারণ করে। মাধ্যমটিও অন্ধকার করতে পারে, তবে এর অর্থ একটি ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া নয়।

এই রিএজেন্টের সাথে, প্রতিক্রিয়া সময়টি অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ, একটি রঙ পরিবর্তন যা 5 থেকে 15 সেকেন্ডের মধ্যে ঘটে একটি ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া হিসাবে বিবেচিত হয়।

-গর্ডন এবং ম্যাকলিয়ড রিএজেন্ট

এটি ডাইমথাইল-পি-ফেনাইলেনিডিয়ামাইন ডাইহাইড্রোক্লোরাইড সমন্বয়ে গঠিত, এটি এন-ডাইমেথাইল-পি-ফেনাইলেনিডিয়ামাইন বা পি-এমিনোডিমেথিল্যানিলাইন মনোহাইড্রোক্লোরাইড হিসাবেও পরিচিত। কোভাক্স অক্সিডেস রিএজেন্টের জন্য বর্ণিত হিসাবে এটি প্রস্তুত করা হয়েছে, এতে জড়িত পদার্থের পরিবর্তে।

এই রিএজেন্ট কোভাক্স অক্সিডেস রিএজেন্টের তুলনায় কিছুটা স্থিতিশীল, যদিও পি-ফেনাইলেনিডিয়ামিনযুক্ত সমস্ত রিজেন্ট অস্থির।

এই প্রতিক্রিয়াটি পরে, এটি 10 ​​থেকে 30 মিনিটের মধ্যে নীল-বেগুনি রঙের উপস্থিতি সহ ইতিবাচক হিসাবে ব্যাখ্যা করা হয়।

-নাদি রিএজেন্ট

এটি ইথাইল অ্যালকোহলে 1% α-নেফথল (95% ইথানল) এবং 1% অ্যামিনোডিমেথিলানিলিনের সমন্বয়ে গঠিত। মিশ্রণটি সমান অংশে প্রস্তুত করা হয় এবং 100 মিলি পরিমাণে পর্যাপ্ত পরিমাণ তৈরি না করা পর্যন্ত নিরঙ্কুশ ইথিল অ্যালকোহল ব্যবহার করা হয়।

কার্পেন্টার, সুহরল্যান্ড এবং মরিসন রিজেন্ট

এটি 1% পি-এমিনোডিমেথিল্যানাইন অক্সালেট দ্বারা গঠিত। সম্পর্কিত পদার্থের জন্য পরিবর্তন করে কোভাক্স অক্সিডেস রিএজেন্টের জন্য বর্ণিত একইভাবে প্রস্তুত করুন।

প্রস্তুত সমাধানের সাথে, পরীক্ষার স্ট্রিপগুলি নিম্নরূপে প্রস্তুত করা হয়: 6-8 সেমি হোয়াটম্যান নং 1 ফিল্টার পেপার স্ট্রিপগুলি 1% ডাইমেথাইল-পি-ফিনাইলেনডায়ামিন অক্সালেট রিএজেন্ট সহ গর্ভে থাকে।

তাদের ধাতব সাথে যোগাযোগ ছাড়াই শুকনো অনুমতি দেওয়া হয়, স্ক্রু-ক্যাপড জারগুলিতে ডেস্কিসেন্টের সাথে স্ট্রিজ রেখে ফ্রিজে রেখে দিতে হবে in এই স্ট্রিপগুলি 6 মাস পর্যন্ত স্থিতিশীল থাকে।

এটি উল্লিখিত সমস্তগুলির মধ্যে সর্বাধিক স্থিতিশীল রিএজেন্ট, এবং সমাধানে 6 মাস পর্যন্ত স্থায়ী হতে পারে। আরেকটি প্লাস পয়েন্ট হ'ল এটি কলোনির চারপাশে মাঝারিটি রঙ করে না, যদি এটি সরাসরি প্লেটে ব্যবহার করা হয়।

একটি লাল রঙের চেহারাটি ইতিবাচক পরীক্ষা হিসাবে ব্যাখ্যা করা হয়।

-অক্সিডেস ডিস্ক

তারা বাণিজ্যিক ডিস্ক যা অক্সিডেস পরীক্ষার জন্য রিএজেন্টের সাথে জড়িত। বাজারে বেশ কয়েকটি বাণিজ্যিক ব্র্যান্ড রয়েছে।

এটির ব্যবহারটি বেশ ব্যবহারিক, যেহেতু তাজা রিএজেন্টগুলি প্রস্তুত করা প্রয়োজন হয় না, যা কাজটি সহজতর করে। প্রাপ্ত ফলাফলগুলি যতক্ষণ না ডিস্কগুলি যথাযথভাবে সংরক্ষণ করা হয় ততক্ষণ নির্ভরযোগ্য।

প্রোটোকল

ডাইরেক্ট প্লেট পদ্ধতি, কাগজে অপ্রত্যক্ষ পদ্ধতি এবং অক্সিডেস রিএজেন্টস দ্বারা সংক্রামিত ডিস্কগুলির ব্যবহার।

-ডাইরেক্ট বোর্ড পদ্ধতি

উপরোক্ত রেজিটেন্টগুলির 2 বা 3 ফোঁটা এই উদ্দেশ্যে সরাসরি সংস্কৃতি মিডিয়ামের একটি প্লেটে থাকা কলোনীতে যুক্ত করা হয় যাতে গ্লুকোজ থাকে না।

উপনিবেশগুলির রঙের পরিবর্তন বা না বোঝানো হয়, মাঝারি নয়। বৈধ প্রতিক্রিয়া সময় ব্যবহৃত reagent উপর নির্ভর করে।

- কাগজে ইন্ডাইরেক্ট পদ্ধতি

ফিল্টার পেপারের একটি টুকরো (হোয়াটম্যান নং 1) কেটে 6 সেন্টিমিটার ² আকারে খালি পেট্রি থালাটির ভিতরে রাখুন।

কোভাক্স অক্সিডেসের 2 বা 3 টি ড্রপ পেপারে যুক্ত করুন, একটি প্লাটিনাম হ্যান্ডেল বা কাঠের টুথপিকের সাথে অধ্যয়নের জন্য কলোনির অংশ নিন এবং এটি রিজেন্ট গর্ভস্থ কাগজে সোজা লাইনে ছড়িয়ে দিন। 5 থেকে 10 সেকেন্ডের মধ্যে ব্যাখ্যা করুন।

কার্পেন্টার, সুহরল্যান্ড এবং মরিসন রিজেন্টের সাথে প্রস্তুত রেখাচিত্রমালা দিয়ে শুকনো স্ট্রিপে একটি উপনিবেশ ছড়িয়ে পড়ে। একক স্ট্রিপ বিভিন্ন স্ট্রেন পরীক্ষা করতে ব্যবহৃত হয়। 10 সেকেন্ডে ব্যাখ্যা করুন।

-ডিস্কস (মি।)

সম্পূর্ণরূপে বাণিজ্যিক ডিস্কগুলি জীবাণুমুক্ত পাত্রে জল দিয়ে আর্দ্র করুন এবং অধ্যয়ন করার জন্য কলোনির সুপারপোজ। 35 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে প্লেটগুলি ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়, যদি ঘরের তাপমাত্রায় বা রেফ্রিজারেটেড প্লেটগুলি ব্যবহার করা হয় তবে প্রতিক্রিয়াটি কিছুটা ধীর হয়। 10 থেকে 20 সেকেন্ডের মধ্যে রঙ পরিবর্তনের ব্যাখ্যা করুন।

রক্ত বা চকোলেট আগরগুলিতে থাকা উপনিবেশগুলি ব্যবহার করা যেতে পারে।

ডিস্কস (অপ্রত্যক্ষ পদ্ধতি)

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে ডিস্ক স্যাঁতসেঁতে। এটি একটি খালি পেট্রি থালায় রাখুন। প্লাটিনাম হ্যান্ডেল বা কাঠের টুথপিকটি নিয়ে অধ্যয়নের জন্য পর্যাপ্ত পরিমাণ কলোনি নিন এবং ডিস্কে রাখুন। 10 থেকে 20 সেকেন্ডের মধ্যে রঙ পরিবর্তনের ব্যাখ্যা করুন।

ব্যবহার

নিসেরিয়া এবং অ্যাকিনেটোব্যাক্টর জেনাসটি কখনও কখনও খুব একই রকমের আকারের হয়ে থাকে কারণ যদিও অ্যাকিনেটোব্যাক্টর একটি জ্যাম-নেতিবাচক রড হলেও এটি কখনও কখনও কোকয়েড ফর্ম নিতে পারে এবং জোড়ায় বিতরণ করতে পারে, নিসেরিয়া জিনাসকে অনুকরণ করে।

এক্ষেত্রে অক্সিডেস পরীক্ষা সত্যই কার্যকর। নিসেরিয়া জেনাসটি ধনাত্মক এবং অ্যাকিনেটোব্যাক্টর নেতিবাচক।

যাইহোক, মোরাক্সেলা জিনাস নীসেরিয়া প্রজাতির সাথে খুব মিল এবং উভয়ই একটি ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া দেয়; এই কারণেই কার্বোহাইড্রেট গাঁজন পরীক্ষা অবশ্যই সর্বদা নিশ্চিত সনাক্তকরণের জন্য করা উচিত।

অন্যদিকে, অ্যাসিডেস টেস্টটি এন্টারোব্যাক্টেরিয়াস পরিবার সম্পর্কিত সমস্ত জীবাণু (সমস্ত অক্সিডেস নেতিবাচক) যেমন অন্য জালিয়াতি থেকে পাস্তেরেলা, অ্যারোমোনাস, প্লেসোমোনাস (অক্সিডেস পজিটিভ) জেনাস থেকে পৃথক করতে দরকারী।

জিবাস ভিবিরিও এবং হেলিকোব্যাক্টরও অক্সিডেস পজিটিভ।

QA তে

ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে সিডোমোনাস এেরুগিনোসার স্ট্রেনগুলি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ইসেরিচিয়া কলির পরিচিত স্ট্রেনগুলি ব্যবহার করুন।

সীমাবদ্ধতা

-এই রিজেন্টগুলি অবশ্যই তাজা প্রস্তুত করে ব্যবহার করা উচিত, ঘরের তাপমাত্রায় সমাধানে তাদের বালুচরনের জীবনকাল খুব কম কারণ তারা খুব অস্থির। রেফ্রিজারেটেড এগুলি 5 দিন থেকে 2 সপ্তাহের মধ্যে থাকতে পারে।

-এই রিজেন্টগুলি বর্ণহীন, যদি তারা রঙ পরিবর্তন করে তবে অবশ্যই তা ফেলে দেওয়া উচিত। ক্ষতিগ্রস্ত ডিস্কগুলি প্রদর্শিত হবে কারণ তারা সময়ের সাথে সাথে অন্ধকার হয়ে যায়।

-কোভাক্স অক্সিডেস রিজেন্টের সাথে 15-60 সেকেন্ডের মধ্যে একটি ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া একটি বিলম্বিত প্রতিক্রিয়া হিসাবে বিবেচিত হয় এবং 60 সেকেন্ডের পরে এটি নেতিবাচক হিসাবে বিবেচনা করা উচিত।

-হাইমোফিলাস ইনফ্লুয়েঞ্জা যদি ডাইমেথাইল-পি-ফেনাইলেনডায়ামিনের সাথে কোনও রিজেন্ট ব্যবহার করা হয় তবে নেতিবাচক অক্সিডেস প্রতিক্রিয়া দেয় তবে কোভাক্স অক্সিডেস রিজেেন্ট (টেট্রেমেথাইল-পি-ফিনাইলেনডায়ামিন) ব্যবহার করা হলে ইতিবাচক।

-গ্লুকোজযুক্ত মিডিয়ামগুলি পরীক্ষায় হস্তক্ষেপ করে, মিথ্যা নেতিবাচক দেয়।

-বোর্ডেলেলা পের্টুসিস স্ট্রেনগুলি যদি উচ্চ ঘন ঘন রক্ত ​​আগর প্লেট থেকে আসে তবে তারা মিথ্যা ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া দিতে পারে।

-ধাতব (লোহা) হ্যান্ডলসের ব্যবহার মিথ্যা ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া দেয়।

সুপারিশ

-সেহেতু খুব বেশি অস্থির এবং স্ব-জারণের দিকে ঝোঁক থাকায়, 1 থেকে 2 মিলি পরিমাণে অ্যালিকোটস হিমায়িত করা এবং প্রয়োজনমতো অপসারণ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

- রিএজেন্টের অটো-অক্সিডেশন বিলম্ব করার অন্য কোনও উপায় হ'ল রিএজেন্টগুলি প্রস্তুত করার সময় 0.1% অ্যাসকরবিক অ্যাসিড যুক্ত করা।

-যেহেতু রিএজেন্টগুলি অস্থির, সাপ্তাহিক মান নিয়ন্ত্রণের প্রস্তাব দেওয়া হয়।

- মান নিয়ন্ত্রণের পরীক্ষায় পাস না হওয়া রিটারেন্টগুলি ব্যবহার করা উচিত নয়।

তথ্যসূত্র

1. কোনেম্যান ই, অ্যালেন এস, জান্ডা ডাব্লু, শ্রেকেনবার্গার পি, উইন ডাব্লু। (2004)। মাইক্রোবায়োলজিকাল ডায়াগনোসিস। 5 তম সংস্করণ। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা এসএ আর্জেন্টিনা।
2. ফোর্বস বি, সাহম ডি, ওয়েসফেল্ড এ (২০০৯)। বেইলি এবং স্কট মাইক্রোবায়োলজিকাল ডায়াগনোসিস। 12 এড। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা এসএ আর্জেন্টিনা।
3. "অক্সিডেস পরীক্ষা।" উইকিপিডিয়া, মুক্ত বিশ্বকোষ থেকে. জানুয়ারী 15 2018, 10:32 ইউটিসি। 3 এপ্রিল 2019, 14:03
4. বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা. ডেভেলপিং ওয়ার্ল্ডে জনস্বাস্থ্যের গুরুত্বের ব্যাকটেরিয়াল রোগজীবাণুগুলির অ্যান্টিমাইক্রোবিয়ালগুলির সংবেদনশীলতা সনাক্তকরণ এবং পরীক্ষার জন্য পরীক্ষাগার ম্যানুয়াল 2004 2004। এখানে উপলব্ধ: who.int/drugresistance/infosharing
5. জীবাণুগুলিতে অক্সিডেস ক্রিয়াকলাপ নির্ণয়ের জন্য রিএজেন্ট স্ট্রিপস। রেভ কিউবানা মেড ট্রপ। 2000; 52 (2): 150-151।