লভেনস্টাইন-জেনসেন মাধ্যম: ভিত্তি, প্রস্তুতি এবং ব্যবহার - জীববিদ্যা - 2025

Löwenstein-জেনসেন মাঝারি বিচ্ছিন্নতা এবং এই ধরনের মাইকোব্যাকটেরিয়াম যক্ষ্মা, এম avium অন্যান্যের মধ্যে যেমন মহাজাতি মাইকোব্যাকটেরিয়াম এর ব্যাকটেরিয়া, উন্নয়নে নির্বাচনী কঠিন মাঝারি, leprae প্রজাতির ব্যতিক্রম, যা culturable নয় সাথে।

প্রচলিত সংস্কৃতি মিডিয়াতে মাইকোব্যাক্টেরিয়াম জিনের ব্যাকটিরিয়া বৃদ্ধি পায় না, সুতরাং তাদের বিচ্ছিন্নতার জন্য একটি বিশেষ মাধ্যমের নকশা করা প্রয়োজন ছিল। আসল মাধ্যমটি লভেনস্টাইন তৈরি করেছিলেন এবং পরে জেনসেন দ্বারা সংশোধন করেছিলেন।

মাইকোব্যাক্টেরিয়াম যক্ষ্মার কলোনী সহ লভেনস্টাইন-জেনসেন মাধ্যম। উত্স: আগরওয়াল এট আল / বায়োমেড সেন্ট্রাল লিমিটেড, বায়োলজি ইমেজ লাইব্রেরির সৌজন্যে

এই পরিবর্তনটি কঙ্গো লাল রঙের নির্মূলকরণের অন্তর্ভুক্ত, এটি ম্যালাচাইট সবুজগুলির একটি উচ্চ ঘনত্বের সাথে প্রতিস্থাপন করে। এটি ম্যাগনেসিয়াম সাইট্রেট এবং মনোপোটাসিয়াম ফসফেটের ঘনতাকেও পরিবর্তন করেছিল।

লভেনস্টাইন-জেনসেন মিডিয়ামে বর্তমানে আলুর স্টার্চ, অ্যাস্পারাজিন, ম্যাগনেসিয়াম সাইট্রেট, মনোপোটাসিয়াম ফসফেট, ম্যাগনেসিয়াম সালফেট, ম্যালাচাইট সবুজ, নালিডিক্সিক অ্যাসিড, সাইক্লোহেক্সিমাইড, লিংকোমাইসিন, পিটানো ডিম, গ্লিসারিন এবং জল রয়েছে।

মাইকোব্যাকটিরিয়া সাধারণত এমন সাইট থেকে বিচ্ছিন্ন হয় যা স্পটাম, প্রস্রাব, ফোড়া ইত্যাদির মতো জীবাণুমুক্ত নয়। এর অর্থ হ'ল বেশিরভাগ নমুনাগুলিতে এই অঞ্চলের স্বাভাবিক মাইক্রোবায়োটা, প্লাসোজেন থাকবে।

এ কারণেই লভেনস্টাইন-জেনসেন মিডিয়ামে ম্যালাচাইট গ্রিন, অ্যান্টিবায়োটিক এবং অ্যান্টিফাঙ্গাল দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করে এর রচনায় একাধিক প্রতিবন্ধক রয়েছে।

এছাড়াও, অ-জীবাণুমুক্ত সাইটগুলি থেকে আসা নমুনাগুলি ল্যাভেনস্টাইন-জেনসেন মাঝারি ক্ষেত্রে বীজ হওয়ার আগে অবশ্যই পুনরায় নির্মূল ও নিরপেক্ষ হতে হবে।

ভিত্তি

লভেনস্টাইন-জেনসেন মিডিয়ামে ডিম এবং গ্লিসারিনের উপস্থিতি মাইকোব্যাকটিরিয়ার বৃদ্ধিকে উদ্দীপিত করে কারণ তারা এই অণুজীবগুলির বিকাশের জন্য প্রয়োজনীয় ফ্যাটি অ্যাসিড এবং প্রোটিন সরবরাহ করে।

লভেনস্টাইন-জেনসেন মিডিয়ামে ম্যালাচাইট সবুজ রয়েছে, এটি মাইক্রোবায়োটার সাথে বাধা দেয়। তবে এতে নালিডিক্সিক অ্যাসিড (35 /g / mL) রয়েছে, যা গ্রাম নেগেটিভ মাইক্রোবায়োটা, সাইক্লোহেক্সিমাইড (400 /g / এমএল) বাধা দেয়, যা স্যাপ্রোফাইটিক ছত্রাক এবং ইয়েস্টসকে বাধা দেয় এবং লিংকোমাইসিন (2 µ / এমএল), যা গ্রাম পজিটিভ মাইক্রোবায়োটাকে বাধা দেয়।

কিছু বাণিজ্যিক ঘরবাড়ি নিম্নলিখিত অ্যান্টিবায়োটিকগুলির সংমিশ্রণ যুক্ত করতে পছন্দ করে: পলিমিক্সিন বি 200,000 ইউনিট / এল, এমফোটেরিসিন বি 10 মিলিগ্রাম / এল, কার্বেনিসিলিন 50 মিলিগ্রাম / এল এবং ট্রাইমেথোপ্রিম 10 মিলিগ্রাম / এল।

এই মাঝারিটিতে আগর থাকে না, সুতরাং জীবাণুমুক্তকরণের সময় ডিমের মধ্যে থাকা অ্যালবামিন জমাট বাঁধার কারণে মাঝারিটির দৃ solid়তা ঘটে।

প্রস্তুতি

ডিহাইড্রেটেড মিডিয়ামের ওজন 37.3 গ্রাম 600 ডিগ্রি পানিতে মিশ্রিত পানিতে যা আগে 12 মিলি গ্লিসারল যুক্ত করা হয়েছিল। মিশ্রণটি উত্তপ্ত হয়, সম্পূর্ণ দ্রবীভূত হওয়া পর্যন্ত ঘন ঘন নাড়তে হবে। 15 মিনিটের জন্য 121 ডিগ্রি সেলসিয়াসে মাঝারিটি অটোক্লেভ করুন।

অন্যদিকে, অ্যাপেপটিক পরিস্থিতিতে 1000 মিলি তাজা ডিমের একজাতীয় স্থগিতাদেশ প্রস্তুত করা উচিত। 50 - 60 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় প্রস্তুত মাঝারি 600 মিমি ডিমের সাসপেনশন যুক্ত করুন, এয়ার বুদবুদগুলি এড়িয়ে চলুন।

অটোক্লেভে জীবাণুমুক্ত হওয়ার পরে অ্যান্টিবায়োটিক দ্রবণগুলিও যুক্ত করা হয়।

জীবাণুমুক্ত স্ক্রু-পরীক্ষিত টিউবগুলিতে মাঝারিটি.ালা। একটি ঝুঁকির অবস্থানে 45 মিনিটের জন্য 85 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে নলগুলি গরম করুন।

প্রস্তুত মিডিয়ামের রঙ অ্যাকোমারাইন সবুজ এবং ডিমের লিপিডগুলির উপস্থিতির কারণে সাদা রঙের দাগ উপস্থিত হতে পারে।

মাধ্যমের পিএইচ অবশ্যই 7.2 ± 0.2 হতে হবে

একটি রেফ্রিজারেটরে টিউব সঞ্চয় করুন এবং ব্যবহার না করা পর্যন্ত সরাসরি আলো থেকে সুরক্ষিত। বপনের আগে মেজাজ

"লভেনস্টাইন জেনসেনের গ্রুফ্ট পরিবর্তন" নামে পরিচিত একটি মাধ্যম রয়েছে। এটি ক্লাসিক মাধ্যমের মতো একই যৌগগুলি অন্তর্ভুক্ত করে তবে আরএনএ -5 এমজি / 100 এমএল যুক্ত করা হয় এবং ইনহিবিটার হিসাবে এটিতে ম্যালাচাইট সবুজ 0.025 গ্রাম / 100 এমএল, পেনিসিলিন 50 ইউ / এমএল এবং নালিডিক্সিক অ্যাসিড 35 ইউজি / এমএল থাকে।

অ্যাপ্লিকেশন

লভেনস্টাইন-জেনসেন মাঝারিটি বিভিন্ন ধরণের নমুনা থেকে মাইকোব্যাকটিরিয়ার বিচ্ছিন্নকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়। জাইহেল-নেলসনের দাগ এমন কোনও নমুনার জন্য সুপারিশ করা হয় যাতে মাইকোব্যাকটিরিয়ার উপস্থিতি সন্দেহ হয়।

কিছু নমুনা জীবাণুমুক্ত সাইট থেকে আসে তবে অন্যরা তা দেয় না। অ-নির্বীজনিত নমুনাগুলি যথাযথ হিসাবে পুনঃনির্ধারণ করতে হবে:

থুতু

স্পটাম নমুনাগুলি নিম্নরূপে পুনঃনির্ধারণ করা উচিত: মিলিতে স্পুটাম নমুনার পরিমাণ নির্ধারণ করুন এবং নমুনায় একই পরিমাণ 4% NaOH যুক্ত করুন এবং 37 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে সঞ্চারিত করুন

30 মিনিটের মধ্যে ঘন ঘন মিশ্রণটি ঝাঁকুন। পরবর্তী সময়ে 30 মিনিটের জন্য 3000 আরপিএম এ সেন্ট্রিফিউজ।

একটি ফেনোলিক জীবাণুনাশক সমাধানের উপর সুপারেনট্যান্ট ত্যাগ করুন। বপনের জন্য পলি ব্যবহার করুন তবে প্রথমে পিএইচ অবশ্যই নিরপেক্ষ হতে হবে।

পলিকে নিরপেক্ষ করার জন্য, 5% এইচ ₂ এসও _{4 টি} ফেনোল লাল সূচকটির উপস্থিতিতে ব্যবহৃত হয় যতক্ষণ না এটি একটি নিরপেক্ষ পিএইচ না পৌঁছায় যা সালমন রঙের কারণ হয়ে থাকে।

গ্যাস্ট্রিক ল্যাভেজ, ব্রোঙ্কিয়াল ল্যাভেজ এবং ব্রোঙ্কিয়াল অ্যাসপিরেট

এই ক্ষেত্রে, নমুনাটি 30 মিনিটের জন্য 3000 আরপিএম এ কেন্দ্রীভূত করতে হবে। সুপারেনট্যান্ট ফেলে দেওয়া হয় এবং ট্যাবলেট ব্যবহার করা হয়। পলি নিরোধক করতে, 4% NaOH এর 3 মিলি যোগ করুন এবং আধা ঘন্টা সময় ধরে 37 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে ঘন ঘন নাড়ুন।

আবার সেন্ট্রিফিউজ, সুপারেনট্যান্ট ফেলে দেওয়া হয় এবং ট্যাবলেট ব্যবহার করা হয়। পরেরটি স্পুটমের নমুনায় বর্ণিত হিসাবে নিরপেক্ষ হতে হবে।

প্রস্রাব

নমুনাটি 24 ঘন্টা ফ্রিজে স্থির হওয়ার অনুমতি দিন। সুপারেনট্যান্টকে আলাদা করুন। অবশিষ্ট গুলি 3000 আরএমপি এ 30 মিনিটের জন্য কেন্দ্রীভূত করা উচিত। সুপারেনট্যান্টটি আবার ফেলে দিন এবং 3 মিলি জীবাণুমুক্ত শারীরবৃত্তীয় দ্রবণ দিয়ে গুলিটি পুনরায় গঠন করুন।

4% NaOH এর 3 মিলি যোগ করুন এবং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে ডিকন্টিমিনেশন এবং নিরপেক্ষকরণের দিকে এগিয়ে যান।

Ascites তরল, প্লুরাল তরল, সেরিব্রোস্পাইনাল তরল

এই ধরণের নমুনায় এটি সেন্ট্রিফিউজড এবং সুপারেনট্যান্ট ফেলে দেওয়া হয়। পলির উপর একটি গ্রাম সঞ্চালন করুন বা সরাসরি মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করুন; যদি ব্যাকটিরিয়া পর্যবেক্ষণ না করা হয়, তবে সংক্ষেপণ পদক্ষেপটি প্রয়োজনীয় নয়, বা নিরপেক্ষকরণের পদক্ষেপও নয়।

এক্ষেত্রে পলল ব্যবহার করে সরাসরি নমুনা বীজ দেওয়া যায়। যদি ব্যাকটিরিয়া থাকে তবে উপরোক্ত বর্ণনানুযায়ী পুনরায় সংশোধন ও নিরপেক্ষ হওয়ার জন্য এগিয়ে যান।

Biopsies

এই ধরণের নমুনায়, 5 মিলি পাত্রে জল 10 মিনিটের জন্য 1500 আরপিএম-এ পরে সেন্ট্রিফিউজে যুক্ত করতে হবে। সুপারিনেট্যান্ট ত্যাগ করুন এবং 30 মিনিটের জন্য 3500 আরপিএম-তে পেলিটটি পুনরায় কেন্দ্রবিন্দু করুন। কালচার মাধ্যম বপন করতে পলল ব্যবহার করুন।

ল্যারেনজিয়াল সোয়াব

সোয়াবকে জীবাণুমুক্ত নলের মধ্যে সমান অংশে পাতিত জল এবং 4% NaOH রাখতে হবে। সোয়াবটি টিউবটির দেয়ালের বিরুদ্ধে চাপতে হবে যাতে নমুনাটি তরলে মিশ্রিত হয়। পলি এবং পলি ব্যবহার। ইতিমধ্যে বর্ণিত হিসাবে পলল নিরপেক্ষ।

বোনা

লভেনস্টাইন-জেনসেন মাঝারি মাধ্যমের পৃষ্ঠের উপরে নমুনার 0.5 মিলি যোগ করে ইনোকুলেট করা হয়। মাঝারি মাধ্যমে নমুনা বিতরণ করতে নলটি ঘোরান। প্ল্যাটিনাম হ্যান্ডেল ব্যবহার করবেন না।

মেকোব্যাক্টেরিয়াম বোভিস এবং অন্যান্য প্রজাতিগুলি লভেনস্টেইন-জেনসেন মিডিয়ামে বৃদ্ধি না পাওয়ার জন্য স্টোনব্রিংক মিডিয়ামযুক্ত একটি দ্বিতীয় নল বীজযুক্ত করা যেতে পারে।

অণ্ডস্ফুটন

ইনোকুলেটেড টিউবগুলি বায়বীয়ভাবে তাপমাত্রা 37 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড হয় এবং ক্যাপটি কিছুটা আলগা হয় এবং প্রায় 5 at থাকে এবং হালকা থেকে সুরক্ষিত থাকে। 5-10% কার্বন ডাই অক্সাইড দিয়ে পরিবেশ সমৃদ্ধ করা যায়। কলোনী উপস্থিত না হওয়া পর্যন্ত সপ্তাহে দু'বার সংস্কৃতি পরীক্ষা করুন।

নমুনা শোষিত হয়ে গেলে ক্যাপগুলি আরও শক্ত করা হয়। সর্বাধিক ইনকিউবেশন সময় 8 সপ্তাহ হয়, যদি এই সময়ের পরে কোনও বৃদ্ধি না হয় তবে এটি নেতিবাচক হিসাবে প্রতিবেদন করা হয়।

QA তে

নিম্নলিখিত স্ট্রেনগুলি মান নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে:

মাইকোব্যাক্টেরিয়াম যক্ষ্মা এটিসিসি 27294, মাইকোব্যাক্টেরিয়াম ক্যানসাসি এটিসিসি 12478, মাইকোব্যাক্টেরিয়াম বোভিস এটিসিসি 19219, মাইকোব্যাক্টেরিয়াম ফোর্টুইটাম এটিসিসি 6820, এসিরসিওসিওসিসিসিসি 32015, ক্রিসটোককস 15156

উল্লিখিত প্রথম তিনটি প্রজাতির জন্য দুর্দান্ত বিকাশ আশা করা যায়, এম। ফরকুইটামের বৃদ্ধি ভাল হওয়া উচিত, যখন এম বোভিসের পক্ষে খুব কম বা কোনও বৃদ্ধি আশা করা যায় না। এদিকে, মাইকোব্যাক্টেরিয়াম জেনাস ব্যতীত অন্য প্রজাতিগুলিকে অবশ্যই পুরোপুরি বাধা দিতে হবে।

সীমাবদ্ধতা

প্রস্তুত মাধ্যমটি অবশ্যই হালকা থেকে রক্ষা করতে হবে, আলোর দীর্ঘায়িত এক্সপোজারের কারণে মাঝারিটি সবুজ থেকে নীলতে পরিণত হয়, এক্ষেত্রে মাঝারিটি আর ব্যবহার করা যাবে না। এটি কারণ ম্যালাচাইট সবুজ আলোক সংবেদনশীল।

মাধ্যমটি যেমন এটি ডিম থাকে, সহজেই কলুষিতভাবে পরিচালনা না করা হলে এটি দূষিত হতে পারে। এটি প্রোটোলিটিক ব্যাকটিরিয়া দ্বারা দূষিত হয়ে গেলে দ্রবীভূত হতে পারে।

মাইকোব্যাক্টেরিয়াম জেনের ব্যাকটিরিয়া চাষ ও পরিচালনা করার জন্য উপযুক্ত কর্মী প্রয়োজন, যারা জৈব-নিরাপত্তা ব্যবস্থাগুলি সম্পর্কে অবগত আছেন যা অন্যদের দূষিত বা দূষিত হতে না পারে তা অনুসরণ করতে হবে।

সোডিয়াম ক্লোরাইড গঠনের কারণে এইচসিএলটি নিরপেক্ষকরণের ধাপে ব্যবহার করা উচিত নয়, যা কোচের ব্যাসিলাসের জন্য বিষাক্ত হতে পারে।

নমুনাগুলি প্রক্রিয়াজাতকরণের সময় ফ্রিজে রাখা এবং আলো থেকে সুরক্ষিত রাখতে হবে protected

উল্লেখ

1. ফ্রান্সিসকো সোরিয়া মেলগিজো পরীক্ষাগার। 2009. লভেনস্টাইন-জেনসেন নির্বাচনী মাধ্যম। এ উপলব্ধ: f-soria.es
2. ব্রিটানিয়া ল্যাবরেটরিজ। 2017. লভেনস্টাইন-জেনসেন মাধ্যম। উপলভ্য: ব্রিটানিয়াবল.কম।
3. নিওজন ল্যাবরেটরিজ লভেনস্টাইন-জেনসেন মাধ্যম। এখানে পাওয়া যায়: Foodafety.neogen.com।
4. "লভেনস্টাইন-জেনসেন মাধ্যম।" উইকিপিডিয়া, মুক্ত বিশ্বকোষ থেকে. 20 নভেম্বর 2018, 15:15 ইউটিসি। 24 এপ্রিল 2019, 18:34। wikipedia.org
5. কোনেম্যান ই, অ্যালেন এস, জান্ডা ডাব্লু, শ্রেকেনবার্গার পি, উইন ডাব্লু। (2004)। মাইক্রোবায়োলজিকাল ডায়াগনোসিস। 5 তম সংস্করণ। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা এসএ আর্জেন্টিনা।
6. ফোর্বস বি, সাহম ডি, ওয়েসফেল্ড এ (২০০৯)। বেইলি এবং স্কট মাইক্রোবায়োলজিকাল ডায়াগনোসিস। 12 এড। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা এসএ আর্জেন্টিনা।
7. ম্যাক ফাদ্দিন জে। (2003)। ক্লিনিকাল গুরুত্বের ব্যাকটেরিয়া সনাক্তকরণের জন্য জৈব রাসায়নিক পরীক্ষা। তৃতীয় সংস্করণ। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা। বুয়েনস আইরেস আর্জেন্টিনা।