দাপি (4 ', 6-ডায়ামিডিনো-2-ফেনিলিনডোল): বৈশিষ্ট্য, যুক্তি, ব্যবহার - রসায়ন - 2025

DAPI (4 ', 6-diamidino-2-phenylindole) প্রতিপ্রভ সম্পত্তি দ্বারা একটি ছোপানো হিসেবে কাজ করে একটি মার্কার ব্যাপকভাবে প্রতিপ্রভা অনুবীক্ষণ শিল্প ব্যবহৃত বা প্রবাহিত cytometry অন্যান্যের মধ্যে। এটি যে প্রতিপ্রভটিটি প্রকাশ করে তা উজ্জ্বল নীল, এর উত্তেজনা 455-461 এনএম (ইউভি আলো) এর মধ্যে ঘটে।

ড্যাপি ডাই মরা কোষগুলির কোষের ঝিল্লিটি খুব সহজেই দিয়ে যেতে পারে। এটি জীবন্ত কোষগুলির নিউক্লিয়াকেও দাগ দিতে পারে, তবে এই ক্ষেত্রে, এর ঘনত্ব অবশ্যই বেশি হবে।

ফ্লুরোসেন্ট ডাই ডিএপিআইয়ের রাসায়নিক কাঠামো। উত্স: চিত্র: ফাইল: DAPI.svg এই ফাইলটির একটি ভেক্টর সংস্করণ। নিকৃষ্ট / রিচার্ড হুইলারের (জেফেরিস) সম্পাদিত চিত্র না হলে এটি এই রাস্টার চিত্রের জায়গায় ব্যবহার করা উচিত

রঙ্গকোষ সেলুলার ডিএনএ অ্যাক্সেস করতে সক্ষম যার জন্য এটির একটি বিশেষ স্নেহ রয়েছে, নাইট্রোজেনাস বেসগুলি অ্যাডেনিন এবং থাইমিনের সাথে দুর্দান্ত অভ্যাসের সাথে আবদ্ধ। এই কারণে কিছু আণবিক জীববিজ্ঞানের কৌশলগুলিতে এটি খুব দরকারী।

এই যৌগটি ইন্ডোল রঞ্জক গোষ্ঠীর অন্তর্গত এবং এথিডিয়াম ব্রোমাইড এবং প্রোপিডিয়াম আয়োডাইডের তুলনায় বিশেষত অ্যাগ্রোজ জেলগুলির তুলনায় ডিএনএর প্রতি বেশি সংবেদনশীলতা দেখা গেছে।

এই ফ্লুরোসেন্ট ডাইয়ের ব্যবহার খুব বিস্তৃত, কারণ এটি দরকারী: অ্যাপোপোটিক প্রসেসের (কোষের মৃত্যু) ডিএনএ-র পরিবর্তন অধ্যয়ন এবং এই প্রক্রিয়াতে কোষগুলি সনাক্তকরণ; ডিএনএ পায়ের ছাপ ফটো (ডিএনএ ফটো মুদ্রণ) জন্য; ব্যাকটিরিয়া দূষণ অধ্যয়ন করতে; বা পারমাণবিক বিভাজন কল্পনা।

এটি ক্রোমোসোমাল ব্যান্ডগুলির অধ্যয়ন, মাইকোপ্লাজমাস এসপি ডিএনএ সনাক্তকরণে, ডিএনএ-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়ায়, ইমিউনোফ্লোরসেন্স দ্বারা কোষের দাগ এবং গণনা এবং এমনকি পরিপক্ক পরাগ শস্যগুলিকে রঙ করার ক্ষেত্রেও ব্যবহার করা হয়েছে।

বৈশিষ্ট্য

ডিএপিআই হ'ল এর রাসায়নিক নামটির সংক্ষিপ্তসার (4 ', 6-ডায়ামিডিনো-2-ফেনিলিনডোল)। এর আণবিক সূত্রটি সি ₁₆ এইচ ₁₅ এন _{5 এর এর} আণবিক ওজন 350.3 has ইউভি আলোর পরিসীমা (345 থেকে 358 এনএম) কাছাকাছি ডিএপিআই-ডিএনএ কমপ্লেক্সের সর্বাধিক উত্তেজনা দেখা দেয়, যখন সর্বাধিক ফ্লুরোসেন্স নির্গমন হয় 455-461 এনএম এর মধ্যে।

এই রঞ্জকটি হলুদ গুঁড়ো হিসাবে চিহ্নিত, তবে এই ফ্লুরোফোর দিয়ে চিহ্নিত কাঠামোগুলি একটি উজ্জ্বল নীল আলো নির্গত করে।

এটি পানিতে দ্রবণীয় যৌগ, তবে এর দ্রবীভূতিকে ত্বরান্বিত করতে কিছুটা তাপ প্রয়োগ করা যেতে পারে। এটি পিবিএস দিয়ে মিশ্রিত করা যেতে পারে তবে এতে সরাসরি দ্রবীভূত করা যায় না।

একবার ছোপানো প্রস্তুত হয়ে গেলে, এটি অবশ্যই অন্ধকারে সংরক্ষণ করতে হবে, যা 2 থেকে 8 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় (রেফ্রিজারেটর) আলো থেকে সুরক্ষিত থাকে। এই পরিস্থিতিতে, ছোপানো 3 সপ্তাহ বা মাসের বেশি স্থিতিশীল থাকে।

যদি এটি আলো থেকে সুরক্ষিত থাকে তবে ঘরের তাপমাত্রায় বাম থাকে তবে এর স্থায়িত্ব 2 বা 3 সপ্তাহে নেমে যায়, তবে সরাসরি আলোর সংস্পর্শে আসা অবনতি খুব দ্রুত হয়। আপনি যদি দীর্ঘ সময়ের জন্য সঞ্চয় করতে চান তবে এটি -20 ডিগ্রি সেলসিয়াস এ আলিকোটে বিতরণ করা যেতে পারে।

ভিত্তি

এই স্টেইনিং মূল আণবিক জীববিজ্ঞানের কৌশলগুলিতে যেমন পারমাণবিক কাউন্টারস্টেইন তৈরির উপর ভিত্তি করে যেমন: ফ্লো সাইটোমেট্রি, ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি এবং মেটাফেস ক্রোমোসোম বা ইন্টারফেজ নিউক্লিয়াসহ অন্যদের মধ্যে দাগ দেওয়া।

এই কৌশলটি ছোটখাটো খাঁজে জিনগত উপাদান (ডিএনএ) থাকা নাইট্রোজেনাস ঘাঁটি (অ্যাডেনিন এবং থাইমিন) এর জন্য ডাইয়ের দুর্দান্ত সখ্যতার উপর ভিত্তি করে তৈরি। সাইটোপ্লাজমিক স্তরে থাকা অবস্থায় এটি খুব অল্প ব্যাকগ্রাউন্ড ছেড়ে যায়।

যখন ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জকতা ডিএনএর অ্যাডেনিন এবং থাইমাইন অঞ্চলগুলিতে আবদ্ধ হয়, তখন ফ্লুরোসেন্স উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পায় (20 গুণ বেশি)। এটি যে রঙটি প্রকাশ করে তা উজ্জ্বল নীল। উল্লেখযোগ্যভাবে, জিসি (গুয়ানাইন-সাইটোসিন) বেস জোড়াগুলিতে আবদ্ধ হওয়ার সময় কোনও প্রতিপ্রভোধ নির্গমন হয় না।

এটি লক্ষ করা গুরুত্বপূর্ণ যে এটি আরএনএর সাথেও একটি সখ্যতা রয়েছে তবে এটি কোনও সমস্যা সৃষ্টি করে না, কারণ এই অণু থেকে সর্বাধিক ডিগ্রি ডিএনএর বিপরীতে অন্য তরঙ্গদৈর্ঘ্য (500 এনএম) এ ঘটে, যা 460 এ এটি করে NM। তদ্ব্যতীত, একবার আরএনএতে আবদ্ধ প্রতিপ্রভ বৃদ্ধি কেবল 20%।

জীবন্ত কোষের চেয়ে মৃত (স্থির) কোষগুলিকে দাগ দেওয়ার জন্য ডিএপিআই বেশি ব্যবহৃত হয়, যেহেতু ডাইয়ের উচ্চতর ঘনত্বের সাথে পরবর্তীটি দাগ দেওয়া প্রয়োজন, কারণ জীবিত অবস্থায় কোষের ঝিল্লি ডিএপিআই-তে খুব কম প্রবেশযোগ্য হয়।

মাল্টি রঙের অভিজ্ঞতার জন্য লাল এবং সবুজ ফ্লুওরোফোর্সের সংমিশ্রণে ডিএপিআই রঞ্জক ব্যবহার করা যেতে পারে।

ব্যবহার

ডিএপিআই (4 ', 6-ডায়ামিডিনো-2-ফেনিলিনডোল) একটি দুর্দান্ত ফ্লুরোফোর এবং তাই বিভিন্ন কৌশল এবং বিভিন্ন উদ্দেশ্যে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। নিম্নলিখিতটি মূল কৌশলগুলিতে ডিএপিআই ব্যবহারের ব্যাখ্যা দেয়।

ফ্লো সাইটোমেট্রি

ডিএনএর প্রতি উচ্চ সংবেদনশীলতা এবং ফ্লুরোসেন্স নিঃসরণে এর উচ্চ তীব্রতার কারণে দারুণ সাফল্য অর্জন করে ১৯ 197৮ সালে গোহাদে, শুমান এবং জ্যান্তে গবেষকরা প্রবাহের সাইটোমেট্রিক প্রযুক্তিতে ফ্লোরোফোর হিসাবে প্রথম DAPI ব্যবহার ও প্রস্তাব করেছিলেন।

এই কৌশলটিতে ডিএপিআই ব্যবহারের ফলে কোষ চক্রের গবেষণা, কোষগুলির পরিমাণ নির্ধারণ এবং জীবিত এবং মৃত কোষগুলির দাগ পড়া যায় allows

যদিও এথিডিয়াম ব্রোমাইড, হচেস্ট অক্সাইড, অ্যাক্রিডিন কমলা এবং প্রোপিডিয়াম আয়োডাইডের মতো অন্যান্য কলারেন্ট রয়েছে, তবে ডিপিআই এর মধ্যে অন্যতম ব্যবহৃত কারণ এটি পূর্বে উল্লিখিতগুলির চেয়ে বেশি ফটোস্টেবল।

এই প্রযুক্তির জন্য এটি কোষগুলি ঠিক করা প্রয়োজন, এটির জন্য পরম ইথানল বা 4% প্যারামফর্মডিহাইড ব্যবহার করা যেতে পারে। নমুনা কেন্দ্রীভূত হয় এবং সুপারেনট্যান্ট ফেলে দেওয়া হয়, ফলস্বরূপ 15 মিনিটের জন্য 5 মিলি পিবিএস বাফার যুক্ত করে কোষগুলি হাইড্রেটেড হয়।

সময় অতিবাহিত হওয়ার সময়, 3 মিমি ঘনকালে স্টেইনিং বাফার (বায়োলেগেন্ড থেকে FOXP3) দিয়ে DAPI দাগ প্রস্তুত করুন।

নমুনাটি কেন্দ্রীভূত করুন, সুপারেনট্যান্টটি ফেলে দিন এবং তারপরে ঘরের তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য 1 মিলি ডিএপিআই দ্রবণ দিয়ে coverেকে রাখুন।

উপযুক্ত লেজার সহ নমুনাটি প্রবাহের সাইটোমিটারে নিয়ে যান।

ফ্লো মাইক্রোফ্লোরোমেট্রি

ডিএপিআই ব্যবহার করা হয় এমন আরও একটি কৌশল হ'ল মিথ্রামাইসিন নামে আরেকটি ফ্লুরোফোরের সাথে মাইক্রো ফ্লুওরোমেট্রি প্রবাহিত হয়। উভয়ই পৃথকভাবে ক্লোরোপ্লাস্ট ডিএনএ মাপার জন্য দরকারী, তবে ডিপিআই 4 টি ব্যাকটিরিওফেজ কণা পরিমাপের জন্য সবচেয়ে উপযুক্ত।

সঙ্করীকরণ

এই কৌশলটি মূলত ডিপিএ হতে পারে এমন একটি ফ্লুরোসেন্ট ডাইয়ের সাথে লেবেলযুক্ত ডিএনএ প্রোব ব্যবহার করে।

ডাবল স্ট্র্যান্ডড ডিএনএকে অস্বীকার করার জন্য এবং নমুনার জন্য তাপ চিকিত্সা প্রয়োজন two পরবর্তীকালে এটি ডিপিআই-লেবেলযুক্ত অস্বচ্ছ ডিএনএ প্রোব দিয়ে সংকরিত হয় যার আগ্রহের ক্রম রয়েছে।

পরে এটি হাইব্রিডাইজড ছিল না তা মুছে ফেলার জন্য ধুয়ে ফেলা হয়, ডিএনএ দেখার জন্য একটি বৈসাদৃশ্য ব্যবহার করা হয়। ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ সংকর পরীক্ষার পর্যবেক্ষণের অনুমতি দেয়।

এই কৌশলটির ক্রমোজোমাল ডিএনএতে নির্দিষ্ট সিকোয়েন্স সনাক্তকরণের উদ্দেশ্য রয়েছে, নির্দিষ্ট কিছু রোগ নির্ণয় করতে সক্ষম হওয়া।

এই সাইটো-আণবিক কৌশলগুলি ক্যারিয়োটাইপস অধ্যয়নের বিবরণ নির্ধারণে খুব সহায়তা করেছে। উদাহরণস্বরূপ, তিনি অ্যাডেনোসিন এবং থাইমাইনের বেস পেয়ার সমৃদ্ধ অঞ্চল যা হেটেরোক্রোমেটিক অঞ্চল বা ডিএপিআই ব্যান্ড নামে পরিচিত।

এই কৌশলটি উদ্ভিদ এবং প্রাণীর ক্রোমোজোম এবং ক্রোমাটিন অধ্যয়নের পাশাপাশি মানুষের প্রাক-প্রসবকালীন এবং হেমোটোলজিকাল প্যাথলজিস নির্ধারণে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।

এই কৌশলটিতে, প্রস্তাবিত ডিএপিআই ঘনত্ব 15 মিনিটের জন্য 150 এনজি / মিলি।

অ্যাসেম্বলড স্লাইডগুলি 2-8 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপ থেকে সুরক্ষিত রাখতে হবে should

ইমিউনোফ্লোরোসেন্স স্টেনিং

কোষগুলি 4% প্যারোফর্মালডিহাইড সহ স্থির করা হয়। যদি অন্য দাগ ব্যবহার করতে হয়, তবে ডিএপিআইটি কাউন্টারস্টেইন হিসাবে শেষে ছেড়ে যায় এবং 15 মিনিটের জন্য কোষগুলি পিবিএস দ্রবণ দিয়ে আবৃত থাকে। সময় অতিবাহিত হওয়ার সময়, পিবিএসের সাথে মিশ্রিত করে DAPI সমাধান প্রস্তুত করুন, যেমন চূড়ান্ত ঘনত্ব 300 300M হয়।

তারপরে অতিরিক্ত পিবিএস সরিয়ে 5 মিনিটের জন্য ডিএপিআই দিয়ে coveredেকে দেওয়া হবে। বেশ কয়েকবার ধোয়া। স্লাইডটি যথাযথ ফিল্টারের অধীনে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের নীচে দেখা হয়।

সুরক্ষা পত্রক

এই যৌগটি অবশ্যই যত্ন সহকারে পরিচালনা করতে হবে, কারণ এটি এমন একটি যৌগ যা মিউটেজেনিক বৈশিষ্ট্যযুক্ত। নিষ্ক্রিয় হওয়া জলীয় দ্রবণগুলি থেকে এই যৌগটি দূর করতে অ্যাক্টিভেটেড কার্বন ব্যবহার করা হয়।

এই reagent দিয়ে দুর্ঘটনা এড়াতে গ্লোভস, গাউন এবং সুরক্ষা চশমা অবশ্যই ব্যবহার করা উচিত। যদি ত্বক বা মিউকোসার সাথে যোগাযোগ হয় তবে অঞ্চলটি পর্যাপ্ত জলে ধুয়ে নেওয়া উচিত।

আপনার এই রিএজেন্টটি কখনই মুখের মাধ্যমে পিপেট করা উচিত নয়, পাইপেট ব্যবহার করুন।

মাইক্রোবিয়াল এজেন্টদের সাথে রিএজেন্টকে দূষিত করবেন না কারণ এটি ভ্রান্ত ফলাফল হতে পারে।

ডিএপিআই দাগকে প্রস্তাবিতের চেয়ে বেশি মিশ্রণ করবেন না কারণ এটি দাগের গুণমানকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করবে।

রিজেন্টটি সরাসরি আলোতে প্রকাশ করবেন না, বা উষ্ণ রাখবেন না কারণ এটি প্রতিপ্রভতা হ্রাস করে।

তথ্যসূত্র

1. ব্র্যামার এস, টোনিয়াজো সি এবং পোয়ার্সচ এল কোরেন্টস সাধারণত উদ্ভিদ সাইটোজেটিক্সের সাথে জড়িত। আরক। ইনস্টিটিউট বায়োল। 2015, 82. থেকে উপলব্ধ: সায়িলো।
2. ইম্পাথ ল্যাবরেটরিজ। DAPI। এখানে উপলভ্য:
3. সাইটোসেল ল্যাবরেটরিজ। 2019. ডিএপিআই ব্যবহারের জন্য নির্দেশাবলী। সাইটোসেল.কম এ উপলব্ধ
4. ইলোসেগি এ, সাবটার এস। রিভার ইকোলজির ধারণা এবং কৌশল। (2009)। সম্পাদকীয় রুবেস, স্পেন। উপলভ্য: book.google.co.ve/
5. নোভাস আর, পেনিটেন্তে এ, তালভানি এ, নাটালি এ, নেভেস সি, মালদোনাডো I. কার্ডিয়াক টিস্যুতে মায়োসাইটের সংখ্যা অনুমান করার জন্য একটি পরিবর্তিত ডিসটেক্টর পদ্ধতিতে ফ্লুরোসেন্সের ব্যবহার। আর্চ। ব্রা। Cardiol। 2012; 98 (3): 252-258। উপলব্ধ থেকে: সায়িলো।
6. রোজাস-মার্তিনিজ আর, জাভালেটা-মেজিয়া ই, রিভাস-ভ্যালেন্সিয়া পি। মেক্সিকোতে পেঁপে (কারিকা পেঁপে) ফাইটোপ্লাজমের উপস্থিতি। চ্যাপিংগো ম্যাগাজিন। উদ্যানতত্ত্ব সিরিজ, ২০১১; 17 (1), 47-50। উপলভ্য: scielo.org।