- ভিত্তি
- মাধ্যমিক রঙিন
- রিজেন্টস
- প্রাথমিক রঙিন
- ব্লিচিং সমাধান
- গৌণ রঙ্গ (পাল্টা ছোপানো)
- প্রযুক্তি
- অ্যাসিড-দ্রুত স্টেনিং পদ্ধতি
- একটি ব্যাকটিরিয়া স্মিয়ার প্রস্তুত করুন
- স্মিয়ার শুকানো
- নমুনা গরম করুন
- দাগ Coverেকে দিন
- দাগ গরম করুন
- দাগ ধুয়ে ফেলুন
- অ্যাসিড অ্যালকোহল দিয়ে স্মিয়ারটি Coverেকে দিন
- দাগ ধুয়ে ফেলুন
- দাগ দিয়ে সোয়ারটি Coverেকে দিন
- দাগ ধুয়ে ফেলুন
- নর্দমা
- মাইক্রোস্কোপের নীচে স্মিয়ার পরীক্ষা করুন
- ফলাফল ব্যাখ্যা করুন
- তথ্যসূত্র
Ziehl-Neelsen একটি শোভা কৌশল অণুজীবের প্রতিরোধী এলকোহল অ্যাসিড (ওআরএ) চিহ্নিত করতে। এই মাইক্রোবায়োলজি পদ্ধতির নামটি এর লেখকদের বোঝায়: ব্যাকটিরিওলজিস্ট ফ্রেঞ্জ জিহেল এবং প্যাথলজিস্ট ফ্রিডরিচ নীলসেন।
এই কৌশলটি এক ধরণের ডিফারেনশিয়াল স্টেইনিং, যা আপনি পর্যবেক্ষণ করতে, আলাদা করতে এবং পরে চিহ্নিত করতে চান এমন কাঠামোর মধ্যে বৈসাদৃশ্য তৈরি করতে বিভিন্ন বর্ণের ব্যবহার বোঝায়। জেহেল-নীলসেনের দাগ নির্দিষ্ট ধরণের অণুজীবকে সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়।
জিহল-নীলসেনের দাগ
এর মধ্যে কয়েকটি জীব হ'ল মাইকোব্যাকটিরিয়া (উদাঃ মাইকোব্যাক্টেরিয়াম যক্ষা), নোকার্ডিয়া (যেমন, নোকার্ডিয়া এসপি।) এবং কিছু এককোষী পরজীবী (যেমন, ক্রিপ্টোস্পরিডিয়াম পারভাম)। অনেকগুলি ব্যাকটেরিয়াকে গ্রে স্টেন নামক একটি সাধারণ প্রযুক্তির মাধ্যমে শ্রেণিবদ্ধ করা যেতে পারে।
তবে কিছু ব্যাকটিরিয়া গ্রুপগুলি তাদের সনাক্ত করতে সক্ষম হওয়ার জন্য অন্যান্য পদ্ধতিগুলির প্রয়োজন require জেহেল-নীলসেনের দাগের মতো কৌশলগুলির জন্য তাপের সাথে রঞ্জকের সংমিশ্রণের প্রয়োজন হয় প্রাচীরের প্রাচীরের প্রাচীরটিকে ঠিক করতে।
তারপরে একটি ব্লিচিং প্রক্রিয়া আসে যা দুটি ফলাফলের জন্য অনুমতি দেয়: অ্যাসিড এবং অ্যালকোহল দ্বারা বর্ণহীনতার প্রতিরোধ বা সংবেদনশীলতা।
ভিত্তি
এই স্টেনিং প্রযুক্তির যৌক্তিকতা এই অণুজীবগুলির কোষ প্রাচীরের বৈশিষ্ট্যের উপর ভিত্তি করে। প্রাচীরটি এক ধরণের ফ্যাটি অ্যাসিড যা মাইকোলিক অ্যাসিড নামে গঠিত; এগুলি খুব দীর্ঘ শৃঙ্খলযুক্ত দ্বারা চিহ্নিত করা হয়।
যখন ফ্যাটি অ্যাসিডগুলির খুব দীর্ঘ কাঠামো থাকে, তারা রঙগুলি আরও সহজেই ধরে রাখতে পারে। কিছু ব্যাকটেরিয়াল জেনারার কোষের প্রাচীরের মাইকোলিক অ্যাসিডগুলির উচ্চ সামগ্রীর কারণে, গ্রাম দাগ দ্বারা দাগ দেওয়া খুব কঠিন।
জেহেল-নেলসনের দাগটি ফেনলিক যৌগিক কার্বল ফুচসিন ব্যবহার করে, এটি একটি মৌলিক দাগ। এটি ঘরে প্রাচীরের ফ্যাটি অ্যাসিডগুলির সাথে যোগাযোগের ক্ষমতা রাখে যা ঘরের তাপমাত্রায় টেক্সচারে মোমযুক্ত xy
কার্বল ফুচিন স্টেনিং তাপের উপস্থিতিতে বৃদ্ধি করা হয়, কারণ মোম গলে যায় এবং রঞ্জক অণুগুলি আরও দ্রুত কোষের প্রাচীরের দিকে চলে যায়।
পরে যে অ্যাসিড ব্যবহার করা হয় তা কোষগুলিকে বিবর্ণ করতে দেয় যা দাগযুক্ত ছিল না কারণ তাদের প্রাচীর ডাইয়ের সাথে পর্যাপ্তভাবে সম্পর্কিত ছিল না; অতএব, অ্যাসিড ব্লিচ শক্তি অ্যাসিড রঞ্জক অপসারণ করতে সক্ষম। এই বিবর্ণতা প্রতিরোধকারী কোষগুলিকে অ্যাসিড-ফাস্ট বলা হয়।
মাধ্যমিক রঙিন
নমুনাটি ডিকোলোরিয়েশনের পরে এটি অন্য ডাইয়ের সাথে বিপরীতে দেখা যায় যাকে বলা হয় গৌণ রঞ্জক। সাধারণত, মিথিলিন নীল বা ম্যালাচাইট সবুজ ব্যবহার করা হয়।
সেকেন্ডারি ডাই ব্যাকগ্রাউন্ড উপাদানকে দাগ দেয় এবং ফলস্বরূপ প্রথম ধাপে দাগযুক্ত কাঠামোর বিপরীতে তৈরি করে। কেবল বর্ণহীন কোষগুলি দ্বিতীয় রঞ্জকটি (কাউন্টারস্টেইন) শোষণ করে এবং তাদের রঙ ধারণ করে, যখন অ্যাসিড-দ্রুত কোষগুলি তাদের লাল রঙ ধরে রাখে।
এই পদ্ধতিটি মাইকোব্যাক্টেরিয়াম যক্ষ্মা এবং মাইকোব্যাক্টেরিয়াম লেপ্রে সনাক্তকরণের জন্য প্রায়শই ব্যবহৃত হয়, যাকে অ্যাসিড-ফাস্ট ব্যাসিলি বলা হয়।
রিজেন্টস
প্রাথমিক রঙিন
0.3% কার্বল ফুচিন (ফিল্টার) ব্যবহার করা হয়। এই রঞ্জকটি অ্যালকোহলগুলির মিশ্রণ থেকে প্রস্তুত করা হয়: ইথানল (90%) বা মিথেনল (95%) এ ফেনল, এবং এই মিশ্রণে 3 গ্রাম বেসিক ফুচসিন দ্রবীভূত হয়।
ব্লিচিং সমাধান
এই পদক্ষেপে 3% অ্যালকোহলিক অ্যাসিড বা 25% সালফিউরিক অ্যাসিডের সমাধান ব্যবহার করা যেতে পারে।
গৌণ রঙ্গ (পাল্টা ছোপানো)
নমুনাগুলির বিপরীতে সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত রঙ্গটি সাধারণত 0.3% মিথাইলেন নীল। তবে অন্যরাও ব্যবহার করতে পারে যেমন 0.5% ম্যালাচাইট সবুজ।
প্রযুক্তি
অ্যাসিড-দ্রুত স্টেনিং পদ্ধতি
একটি ব্যাকটিরিয়া স্মিয়ার প্রস্তুত করুন
এই প্রস্তুতিটি নির্মলতার সতর্কতা অনুসরণ করে একটি পরিষ্কার, শুকনো স্লাইডে করা হয়।
স্মিয়ার শুকানো
ঘরের তাপমাত্রায় স্মিয়ারটি শুকতে দিন।
নমুনা গরম করুন
নীচের স্লাইডে আগুন লাগিয়ে নমুনাটি উত্তপ্ত করা উচিত। অ্যালকোহল নির্ধারণ করা যেতে পারে যখন থুতু দিয়ে স্মিয়ার প্রস্তুত করা হয়নি (এটি সাদা করার জন্য সোডিয়াম হাইপোক্লোরাইট দিয়ে চিকিত্সা করা হয়) এবং যদি তা অবিলম্বে দাগের দিকে না যায়।
এম। যক্ষ্মা ব্লিচ দিয়ে এবং দাগ দেওয়ার প্রক্রিয়া চলাকালীন সরানো হয়। চিকিত্সা না করা থুতু তাপ নির্ধারণ এম। যক্ষা নিহত করবে না, অ্যালকোহল নির্ধারণ ব্যাকটিরিয়াঘটিত হয়।
দাগ Coverেকে দিন
দাগটি কার্বল ফুচিন সলিউশন (প্রাথমিক প্রাথমিক দাগ) দিয়ে আচ্ছাদিত।
দাগ গরম করুন
এটি 5 মিনিটের জন্য করা হয়। আপনার বাষ্পের বিবর্তন লক্ষ্য করা উচিত (প্রায় 60 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড)। বেশি গরম করা এবং নমুনা পোড়ানো এড়ানো গুরুত্বপূর্ণ নয়।
দাগ গরম করার ক্ষেত্রে, কার্বল ফুচিনকে গরম করার সময় অবশ্যই যত্ন নেওয়া উচিত, বিশেষত যদি স্টেইনটি কোনও ট্রে বা অন্য ধারক উপর চালানো হয় যেখানে পূর্ববর্তী স্টেইনিং থেকে অত্যন্ত জ্বলনীয় রাসায়নিক সংগ্রহ করা হয়েছিল।
অ্যাসিডিক অ্যালকোহল, মিথেনল বা 70% ইথানল কয়েক ফোঁটা দিয়ে স্নিগ্ধ পূর্বের লিটল সোয়াব ব্যবহার করে স্লাইডগুলির নীচে কেবল একটি ছোট শিখা প্রয়োগ করা উচিত। এটি আগুনের ঝুঁকি হওয়ায় ইথানলে ভেজানো একটি বিশাল সোয়াব ব্যবহার করা থেকে বিরত থাকুন।
দাগ ধুয়ে ফেলুন
এই ধোয়া অবশ্যই পরিষ্কার জল দিয়ে করতে হবে। যদি ট্যাপের পানি পরিষ্কার না হয় তবে সেক্ষেত্রে ফিল্টারযুক্ত বা পাতিত জল দিয়ে ধুয়ে নিন fe
অ্যাসিড অ্যালকোহল দিয়ে স্মিয়ারটি Coverেকে দিন
এই অ্যাসিড অ্যালকোহল 3% হওয়া উচিত। কভারেজটি 5 মিনিটের জন্য বা যতক্ষণ না সিমিয়ার পর্যাপ্তরূপে বর্ণহীন হয়, অর্থাত্ ফ্যাকাশে গোলাপী রঙের হয়।
এটি অবশ্যই আমলে নেওয়া উচিত যে অ্যাসিডিক অ্যালকোহল জ্বলনযোগ্য; অতএব, এটি খুব যত্ন সহ ব্যবহার করা আবশ্যক। জ্বলন উত্স কাছাকাছি হওয়া এড়ানো।
দাগ ধুয়ে ফেলুন
ওয়াশিং পরিষ্কার, পাতিত জল দিয়ে হওয়া উচিত।
দাগ দিয়ে সোয়ারটি Coverেকে দিন
এটি 1 থেকে 2 মিনিটের জন্য ম্যালিচাইট সবুজ (0.5%) বা মিথাইলিন নীল (0.3%) দাগ হতে পারে, যদি স্মিয়ারটি পাতলা হয় তবে দীর্ঘ সময় ব্যবহার করে।
দাগ ধুয়ে ফেলুন
আবার পরিষ্কার (পাতিত) জল ব্যবহার করা উচিত।
নর্দমা
স্লাইডের পিছনটি পরিষ্কার করা উচিত এবং শুকনো বায়ু প্রবাহিত করার জন্য নিকাশী রেকের উপর দাগ লাগানো উচিত (শুকানোর জন্য শোষণকারী কাগজ ব্যবহার করবেন না)।
মাইক্রোস্কোপের নীচে স্মিয়ার পরীক্ষা করুন
100X উদ্দেশ্য এবং নিমজ্জন তেল অবশ্যই ব্যবহার করা উচিত। পদ্ধতিগতভাবে স্মিয়ার স্ক্যান করুন এবং প্রাসঙ্গিক পর্যবেক্ষণগুলি রেকর্ড করুন।
ফলাফল ব্যাখ্যা করুন
তাত্ত্বিকভাবে, লালচে বর্ণের দাগযুক্ত অণুজীবগুলিকে অ্যাসিড-ফাস্ট পজিটিভ (এএআর +) বলে মনে করা হয়।
বিপরীতে, যদি জীবাণুগুলি কাউন্টার-ডাই হিসাবে ব্যবহৃত ছোপানো রঙের উপর নির্ভর করে নীল বা সবুজ রঙের হয়ে থাকে তবে এগুলিকে অ্যাসিড-ফাস্ট নেগেটিভ (এআরএ) হিসাবে বিবেচনা করা হয়।
তথ্যসূত্র
- অপূর্ব, এস ও সন্ধ্যা, বি (২০১ 2016)। প্রাকটিকাল মাইক্রোবায়োলজির প্রয়োজনীয়তা (প্রথম সংস্করণ)। জেপি ব্রাদার্স মেডিকেল পাবলিশার্স।
- বাউমান, আর। (2014) বডি সিস্টেম দ্বারা রোগ সহ মাইক্রোবায়োলজি (চতুর্থ সংস্করণ)। পিয়ারসন এডুকেশন, ইনক।
- Itতিহ্য, জে।, ইভান্স, ই। ও কিলিংটন, এ। (1996)। ভূমিকা মাইক্রোবায়োলজি (1 ম সংস্করণ)। ক্যামব্রিজ ইউনিভার্সিটি প্রেস.
- মোরেলো, জে।, গ্রানাতো, পি। উইলসন, এম। ও মর্টন, ভি। (2006)। মাইক্রোবায়োলজিতে ল্যাবরেটরি ম্যানুয়াল এবং ওয়ার্কবুক: রোগীদের যত্নের জন্য আবেদন (11 তম সংস্করণ)। ম্যাকগ্রা-পার্বত্য শিক্ষা।
- বসন্তকুমারী, আর। (2007) মাইক্রোবায়োলজির পাঠ্যপুস্তক (প্রথম সংস্করণ)। বিআই পাবলিকেশনস পিভিটি