ইউরিয়া ব্রোথ: ভিত্তি, প্রস্তুতি এবং ব্যবহার - জীববিদ্যা - 2025

ইউরিয়া ঝোল একটি তরল সংস্কৃতি মাঝারি, নির্দিষ্ট অণুজীবের মধ্যে urease এনজাইম উপস্থিতিতে সনাক্ত করতে ব্যবহার করা হয়। ইউরিজ হ'ল একটি মাইক্রোবিয়াল এনজাইম যা গঠনমূলক উপায়ে উত্পাদিত হয়, অর্থাৎ এটি যে স্তরটিতে কাজ করে তা উপস্থিত কিনা তা নির্বিশেষে এটি সংশ্লেষিত হয়।

ইউরিজের কার্যকারিতা জৈব যৌগের পচনের সাথে সম্পর্কিত। সমস্ত অণুজীব এই এনজাইম সংশ্লেষ করতে সক্ষম নয়, তাই পরীক্ষাগারে এর দৃ determination় সংকল্প কিছু ব্যাকটিরিয়া স্ট্রেন সনাক্ত করতে এবং এমনকি একই বংশের প্রজাতির মধ্যে পার্থক্য করতে দেয়।

নেতিবাচক এবং ইতিবাচক ইউরিয়া পরীক্ষা। সূত্র: লেখক এমএসসি তোলা ছবি। মেরিলিসা গিল।

দুটি ধরণের ইউরিয়া পরীক্ষা রয়েছে: স্টুয়ার্ট এবং ক্রিস্টেনসেন। তারা রচনা এবং সংবেদনশীলতার মধ্যে পৃথক। প্রথমটি প্রোটিয়াস প্রজাতির প্রজাতি দ্বারা উত্পাদিত প্রচুর পরিমাণে ইউরিজ দেখানোর জন্য বিশেষ।

দ্বিতীয়টি আরও সংবেদনশীল এবং অন্যান্য ব্যাকটিরিয়া জেনেরা যেমন ক্লিবিসিলা, এন্টারোব্যাক্টর, স্টাফিলোকক্কাস, ব্রুসেল্লা, বোর্দেটেলা, ব্য্যাসিলাস, মাইক্রোকক্কাস, হেলিকোব্যাক্টর এবং মাইকোব্যাকটেরিয়াম দ্বারা স্বল্প পরিমাণে ইউরিজ সনাক্ত করতে পারে।

স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ব্রোথ ইউরিয়া, সোডিয়াম ক্লোরাইড, ডিপোটাসিয়াম ফসফেট, মনোপোটাসিয়াম ফসফেট, ইস্ট এক্সট্র্যাক্ট, ফেনল রেড এবং ডিস্টিলড ওয়াটার দিয়ে তৈরি।

এদিকে, ক্রিস্টেনসেনের ইউরিয়া ব্রোথ বা আগর পেপটোনস, সোডিয়াম ক্লোরাইড, মনোপোটাসিয়াম ফসফেট, গ্লুকোজ, ইউরিয়া, ফেনল লাল, পাতিত জল এবং আগর-আগর দিয়ে তৈরি। পরেরটি কেবল যদি এটি শক্ত মাধ্যম হয়।

ভিত্তি

এনজাইম ইউরিজ হাইড্রোলাইজ ইউরিয়া কার্বন ডাই অক্সাইড, জল এবং অ্যামোনিয়ার দুটি অণু গঠন করে। এই যৌগগুলি অ্যামোনিয়াম কার্বোনেট নামক পণ্যটি তৈরি করতে প্রতিক্রিয়া দেখায়।

স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ব্রোথ

স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ঝোলটি পিএইচ দিয়ে 6.8 বাফার করে more সুতরাং, অণুজীবকে অবশ্যই ফেনল লাল হয়ে যাওয়ার জন্য প্রচুর পরিমাণে অ্যামোনিয়া তৈরি করতে সক্ষম হতে হবে। পিএইচ 8 এর উপরে উঠতে হবে।

সুতরাং, স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ঝোল প্রোটিয়াস প্রজাতির জন্য নির্বাচিত, ইনকিউবেশন থেকে 24 থেকে 48 ঘন্টার মধ্যে ইতিবাচক ফলাফল দেয় এবং এটি ব্যাকটিরিয়াগুলির পক্ষে কার্যকর নয় যেগুলি কম পরিমাণে ইউরিয়া উত্পাদন করে বা ধীরে ধীরে ইউরিয়া হাইড্রোলাইজ করে।

এটি কারণ প্রোটিয়াস প্রজাতিগুলি নাইট্রোজেন উত্স হিসাবে ইউরিয়া ব্যবহার করতে সক্ষম। পরিবর্তে, অন্যান্য ইউরিজ উত্পাদনকারী ব্যাকটিরিয়াগুলির একটি অতিরিক্ত উত্সের প্রয়োজন।

তবে, পেরেজ এট আল। (২০০২) নির্ধারণ করে যে স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ব্রোথ ক্রেডিডা, ক্রিপ্টোকোকাস, রোডোটোরুলা, ট্রাইকোস্পোরন এবং স্যাকারোমাইসিসের জেনারেটের খামিরগুলিতে ইউরিজ নির্ধারণের জন্য খ্রিস্টেনসেনের ইউরিয়া আগর হিসাবে দক্ষ ছিল।

অধ্যয়ন লেখকরা 24 এবং 48 ঘন্টা ইনকিউবেট করার সময় উভয় মিডিয়া (স্টুয়ার্ট এবং ক্রিস্টেনসেন) সাথে 100% চুক্তি অর্জনের দাবি করেছেন; ব্যতিক্রম ব্যতীত যে স্ট্রেনগুলি মিডিয়াগুলিকে একটি শক্ত গোলাপী-ফুচিয়া রঙে পরিণত করতে সক্ষম হয়েছিল তা ইতিবাচক হিসাবে নেওয়া হয়েছিল।

এই ব্যাখ্যাটি প্রয়োজনীয়, যেহেতু লড্ডার (১৯ (০) বলেছিল যে প্রায় সমস্ত ইয়েস্ট খ্রিস্টেনসেন ইউরিয়া আগর বেভেলকে ফ্যাকাশে গোলাপী করে তুলতে পরিচালিত করে। এটি এই সত্যের কারণে যে তারা কম পরিমাণে ইউরিয়া হাইড্রোলাইজ করতে পারে এবং পৃষ্ঠের অ্যামিনো অ্যাসিডের অক্সিডেটিভ ডিকারোবক্সিয়েশন দ্বারা অ্যামাইনস গঠন করে। এটি ইতিবাচক হিসাবে গণ্য করা উচিত নয়।

ক্রিস্টেনসেনের ইউরিয়া আগর বা ব্রোথ

ক্রিস্টেনসেনের ইউরিয়া ব্রোথ বা আগর কম বাফার হয়, অল্প পরিমাণে অ্যামোনিয়া সনাক্ত করতে সক্ষম হয়। তদতিরিক্ত, এই মাধ্যমটি পেপটোন এবং গ্লুকোজ দিয়ে সমৃদ্ধ হয়। এই যৌগগুলি অন্যান্য ইউরিজ উত্পাদনকারী অণুজীবকে বাড়িয়ে তোলে যা স্টুয়ার্ট ব্রোথে বৃদ্ধি পায় না।

একইভাবে, খ্রিস্টেনসেন ইউরিয়া পরীক্ষা দ্রুত ফলাফল দেয়, বিশেষত প্রোটিয়াসের জন্য, ন্যূনতম সময় হিসাবে মাত্র 30 মিনিটে এবং সর্বাধিক সময় হিসাবে 6 ঘন্টা পর্যন্ত দৃ positive় ইতিবাচক উপহার দিতে সক্ষম হয়ে।

ইউরিয়াজ উত্পাদনকারী অণুজীবগুলি বাকি 6 ঘন্টা পরে মাঝারি রঙটি সামান্য আকারে পরিচালনা করতে পারে এবং 24, 48, 72 ঘন্টা বা তারও বেশি পরে, এবং এমনকি কিছু স্ট্রেন 5 বা 6 দিনের পরে দুর্বল প্রতিক্রিয়া দিতে পারে।

উভয় মাধ্যমের ব্যাখ্যা (স্টুয়ার্ট এবং ক্রিস্টেনসেন)

মিডিয়ামটি মূলত হলুদ-কমলা রঙের এবং একটি ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া মাঝারিটির রঙকে গোলাপী-ফুচিয়াতে পরিণত করবে। রঙের তীব্রতা উত্পাদিত অ্যামোনিয়া পরিমাণের সাথে সরাসরি আনুপাতিক।

একটি নেতিবাচক প্রতিক্রিয়া ইয়েস্টগুলি বাদ দিয়ে মূল রঙের মাঝারিটি ছেড়ে দেবে, যা খ্রিস্টেনসেনের ইউরিয়া আগর মাধ্যমের উপর ফ্যাকাশে গোলাপী হতে পারে।

প্রস্তুতি

স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ব্রোথ

বাণিজ্যিক কোম্পানির ইঙ্গিত অনুযায়ী প্রয়োজনীয় গ্রাম ওজন করতে হবে। পছন্দসই জীবাণুমুক্ত পাত্রে জলে দ্রবীভূত করুন। দ্রবীভূত করতে তাপ ব্যবহার করবেন না, কারণ ইউরিয়া উত্তাপের প্রতি সংবেদনশীল।

ঝিল্লি পরিস্রাবণ নির্বীজন করতে ব্যবহৃত হয় used এর জন্য, 0.45 µ ব্যাসের ছিদ্রযুক্ত একটি মিলিপুর ফিল্টার ব্যবহৃত হয়। অটোক্লেভ ব্যবহার করবেন না। সমাধানটি ফিল্টার হয়ে গেলে এটি জীবাণুমুক্ত নলগুলিতে বিতরণ করা হয়। নির্ভরযোগ্য ফলাফল পেতে, এটি ন্যূনতম পরিমাণ হিসাবে 1.5 মিলি এবং নল প্রতি সর্বোচ্চ পরিমাণ হিসাবে 3 মিলিলিটারের মধ্যে স্থানান্তর করা উচিত should

একটি ফ্রিজে সংরক্ষণ করুন এবং ব্যবহারের আগে উষ্ণ করুন।

যদি পরিস্রাবণ পদ্ধতিটি উপলভ্য না হয় তবে নির্ভরযোগ্য ফলাফলগুলি পাওয়ার জন্য মাধ্যমটি অবিলম্বে ব্যবহার করা উচিত।

স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ব্রোথ প্রস্তুত করার আরেকটি উপায় নিম্নরূপ:

কিছু বাণিজ্যিক বাড়িগুলি ইউরিয়া না করে ইউরিয়া পরীক্ষার জন্য বেস মিডিয়াম বিক্রি করে।

বাণিজ্যিক সংস্থার নির্দেশিত পরিমাণটি ওজন করা হয়। এটি পাতিত পানিতে দ্রবীভূত হয় এবং 15 মিনিটের জন্য 121 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে অটোক্ল্যাভে জীবাণুমুক্ত হয়। এটি সামান্য বিশ্রামের জন্য রেখে দেওয়া হয়েছে এবং যখন মাঝারিটি গরম হয়ে যায়, তখন 20% এ প্রস্তুত এবং পরিস্রাবণ দ্বারা নির্বীজনিত 100 ইউরিয়া দ্রবণের 100 মিলি যোগ করুন।

এটি জীবাণুমুক্ত নলগুলিতে বিতরণ করা হয়, যেমনটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে।

ক্রিস্টেনসেনের ইউরিয়া আগর বা ব্রোথ

ইউরিয়া দ্রবণ প্রস্তুতি

পানিশূন্য ইউরিয়া 29 গ্রাম ওজন এবং 100 মিলি পাতিত জলে দ্রবীভূত। নির্বীজন করতে পরিস্রাবণ পদ্ধতিটি ব্যবহার করুন। অটোক্লেভ করবেন না।

-উরিয়া বেস আগর

ডিহাইড্রেটেড বেস আগরের 24 গ্রাম দ্রবীভূত জলে 950 মিলি দ্রবীভূত করুন। 15 মিনিটের জন্য 121 ডিগ্রি সেলসিয়াসে অটোক্লেভে জীবাণুমুক্ত। এটি 50 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড তাপমাত্রায় না পৌঁছানো পর্যন্ত বিশ্রাম দিন এবং আগে থেকেই প্রস্তুত ইউরিয়াটিকে ঝুঁকির সাথে যুক্ত করুন।

জীবাণুমুক্ত টিউবগুলিতে 4-5 মিলি ourালা এবং শক্ত না হওয়া পর্যন্ত iltালুন। একটি দীর্ঘ বাঁশির চাঁচি থাকা উচিত।

এই মাধ্যমটি তরল আকারেও প্রস্তুত করা যেতে পারে।

অ্যাপ্লিকেশন

ইউরিয়া পরীক্ষাটি প্রোটিয়াসের দেওয়া দ্রুত প্রতিক্রিয়া প্রদত্ত ফ্যামিলি এন্টারোব্যাকটেরিয়াতে অন্য জেনার থেকে প্রোটিয়াস জিনাসকে আলাদা করার ক্ষেত্রে অত্যন্ত কার্যকর।

খ্রিস্টেনসেন রচনা ব্যবহার করে, পরীক্ষাটি একই বংশের প্রজাতির মধ্যে পার্থক্য করতে সহায়তা করে। উদাহরণস্বরূপ, এস হিমোলিটিকাস এবং এস ওয়ার্নারি কোগুলাস-নেতিবাচক এবং বিটা-হেমোলিটিক স্ট্যাফিলোকক্কাস, তবে এস এস হিমোলিটিকাস ইউরিয়া নেতিবাচক এবং এস ওয়ার্নারি ইউরিয়া পজিটিভ।

অন্যদিকে, ম্যাকন্ট্রি গ্যাস্ট্রিক মিউকোসা (অ্যান্ট্রাল অঞ্চল) থেকে নেওয়া বায়োপসি নমুনায় হেলিকোব্যাক্টর পাইলোরির উপস্থিতি অধ্যয়নের জন্য ক্রিস্টেনসেনের 2% ইউরিয়া ঝোল সফলভাবে ব্যবহার করেছিলেন।

এইচ। পাইলোরির উপস্থিতি ইতিবাচক ইউরিয়া পরীক্ষার দ্বারা প্রমাণিত। ফলাফলগুলি পর্যবেক্ষণ করার সময়কাল সময়টি সরাসরি উপস্থিত অণুজীবের পরিমাণের সাথে সমানুপাতিক।

যেমন দেখা যায়, গ্যাস্ট্রিক বায়োপসিতে হেলিকোব্যাক্টর পাইলোরি নির্ণয়ের এটি একটি সহজ পদ্ধতি।

শেষ অবধি, এই পরীক্ষাটি ব্রুসেলা, বোর্দেটেলা, ব্য্যাসিলাস, মাইক্রোকোকাস এবং মাইকোব্যাকটিরিয়া জেনার থেকে প্রজাতির পার্থক্য করার জন্যও কার্যকর।

ইউরিয়া পরীক্ষা বপন করা

উভয় পদ্ধতির ফলাফল অনুকূলিত করতে একটি শক্তিশালী মাইক্রোবিয়াল ইনোকুলাম প্রয়োজন require ব্যাকটিরিয়া উপনিবেশগুলি বেশিরভাগ ব্যতিক্রম বাদে রক্ত ​​আগর এবং ইহুদি থেকে সাবুরৌদ আগর থেকে নেওয়া হয়। ইনোকুলামটি তরল মাধ্যমের মধ্যে অন্তর্ভুক্ত থাকে।

স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ব্রোথের জন্য, 24 থেকে 48 ঘন্টা ধরে 37 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে জমে থাকুন, জেনে থাকুন যে স্ট্রেনটি একটি ব্যাকটিরিয়া হলে আপনি কেবল প্রোটিয়াস স্ট্রেনের সন্ধান করছেন। ইয়েস্টগুলির জন্য, এটি 37 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় বা ঘরের তাপমাত্রায় 24 থেকে 48 ঘন্টা ইনকিউবেশন করা যায়।

ক্রিস্টেনসেনের ইউরিয়া ব্রোথের ক্ষেত্রে এটি 24 ঘন্টা ধরে 37 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপিত হয়। যদি পরীক্ষাটি নেতিবাচক হয় তবে এটি 6 দিন পর্যন্ত সজ্জিত হতে পারে। যদি পরীক্ষাটি 6 ঘন্টার আগে ইতিবাচক হয় তবে এটি ইঙ্গিত দেয় যে এটি প্রোটিয়াস বংশের একটি স্ট্রেন।

ক্রিস্টেনসেনের ইউরিয়া আগরের ক্ষেত্রে, আগর বেভালটি দৃct়ভাবে পোকামাকড় ছাড়াই ইনোকুলেটেড। ঝোল একইভাবে ইনকিউবেটেড এবং ব্যাখ্যা করা হয়।

QA তে

মিডিয়াম পরীক্ষা করার জন্য প্রোটিয়াস মিরাবিলিস এটিসিসি 43071, ক্লিবিসিলা নিউমোনিয়া এটিসিসি 7006003, এসচেরিচিয়া কোলি এটিসিসি 25922 এবং সালমোনেলা টাইফিমুরিয়ামের মতো নিয়ন্ত্রণ স্ট্রেন ব্যবহার করা যেতে পারে। প্রথম দুটি ইতিবাচক ফলাফল এবং শেষ দুটি নেতিবাচক ফলাফল দেওয়া উচিত।

উত্স: কোনেম্যান ই, অ্যালেন এস, জান্ডা ডাব্লু, শ্রেকেনবার্গার পি, উইন ডাব্লু। (2004)। মাইক্রোবায়োলজিকাল ডায়াগনোসিস। 5 তম সংস্করণ। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা এসএ আর্জেন্টিনা।

তথ্যসূত্র

1. পেরেজ সি, গুইটিয়া কে।, মাতা এস, হার্টং সি, কোলেলা এম, রেইস এইচ। ইত্যাদি। ইউরিজ পরীক্ষার জন্য স্টুয়ার্টের ইউরিয়া ব্রোথ ব্যবহার করুন, খামিরের সনাক্তকরণের জন্য পরীক্ষা হিসাবে। রেভ। সাক। ভেন। Microbiol। 2002; 22 (2): 136-140। উপলভ্য: Scielo.org।
2. ম্যাক ফাদ্দিন জে। (2003)। ক্লিনিকাল গুরুত্বের ব্যাকটেরিয়া সনাক্তকরণের জন্য জৈব রাসায়নিক পরীক্ষা। তৃতীয় সংস্করণ। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা। বুয়েনস আইরেস আর্জেন্টিনা।
3. ফোর্বস বি, সাহম ডি, ওয়েসফেল্ড এ (২০০৯)। বেইলি এবং স্কট মাইক্রোবায়োলজিকাল ডায়াগনোসিস। 12 এড। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা এসএ আর্জেন্টিনা।
4. কোনেম্যান ই, অ্যালেন এস, জান্ডা ডাব্লু, শ্রেকেনবার্গার পি, উইন ডাব্লু। (2004)। মাইক্রোবায়োলজিকাল ডায়াগনোসিস। 5 তম সংস্করণ। সম্পাদকীয় পানামেরিকানা এসএ আর্জেন্টিনা।
5. ব্রিটানিয়া ল্যাবরেটরিজ। ক্রিস্টেনসেন মিডিয়াম (ইউরিয়া আগর বেস) 2015. উপলভ্য: ব্রিটিয়ানাল্যাব.কম